酸堿性預(yù)測
將每個酸性氨基酸賦值為-1,包括天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、以及C端-COOH。每個堿性氨基酸賦值為+1,包括精氨酸(R)、賴氨酸(K)、組氨酸(H)以及N端-NH2。然后計算整個多肽的電荷數(shù)。
按上述方法計算:如果整段肽的賦值為正,說明所帶電荷是正電荷,該肽是堿性的;如果整段肽的賦值為負,說明所帶電荷是負電荷,該肽是酸性的;如果賦值為零,該肽是中性的。
溶解方法選擇
溶解性是使用多肽時比較重要的問題。每個氨基酸都有其固有化學(xué)特性。如亮氨酸Leu、異亮氨酸Ile、頡氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如賴氨酸Lys、組氨酸His、精氨酸Arg是堿性親水的,再如谷氨酸Glu、天冬氨酸Asp是酸性親水的。因此不同的多肽因其組成不同而具有不同的溶解性。
一般情況下,多肽首先選擇溶解在滅菌的蒸餾水或去離子水中。
如果這個肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入溫和的堿如0.1%的NH3.H2O能夠增加肽的溶解度。相反,對于堿性的肽,溫和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能夠幫助多肽溶解。
某些肽具有很高的疏水性時,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO幫助其溶解,這時推薦將多肽溶解于少量純有機溶劑,然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度。因為鹽會導(dǎo)致疏水性多肽的聚合,所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液進一步稀釋。當(dāng)您遇到這種情況時,請您注意以下幾點說明:
a. DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,這是通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶。
b. 這種試劑的使用可能會對其生物活性及后續(xù)的研究工作造成干擾,請您在溶解時考慮此問題。
如果溶解還是有問題,聲波降解有助于溶解多肽。如果需要用到有機試劑溶解,建議在多肽加入有機試劑后即開始用超聲波助溶,溶解后再加入水或緩沖液稀釋,稀釋過程中再次使用超聲波助溶。
如果您在使用多肽產(chǎn)品時溶解性問題或其它問題,歡迎咨詢,我們會提供最好的服務(wù)。